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sgRNA设计及活性检测虚拟仿真软件根据 CRISPR/Cas9 基因编辑技术的特点，利用计算机虚拟现实技术，通过三维重建和模拟实验等技术手段，建立了sgRNA设计及活性检测虚拟仿真软件。学生可通过该软件学习 CRISPR/Cas9 基因编辑技术的技术原理、应用范围，从而掌握这一最前沿的分子生物学实验技术。北京欧倍尔虚拟仿真的微博视频

CRISPR/Cas9攻略，科研必备！ 听说大年三十还在刷科研帖的朋友，来年实验都会顺利哦！𐟎‰ 一、实验原理 基因敲除：CRISPR/Cas9系统通过Cas9酶切割靶基因组，形成DNA双链断裂。通常情况下，细胞会通过非同源末端连接（NHEJ）方式修复断裂的DNA，修复过程中可能发生碱基插入或缺失，导致移码突变，从而使靶标基因失去功能，实现基因敲除。 基因敲入：CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，进行切割。sgRNA识别并结合目标基因的靶向序列，形成RNA-DNA杂交，激活Cas9酶。Cas9酶作为DNA剪切酶，相对准确地切割目标DNA序列，donor DNA通过同源重组（HDR）将外源基因整合到切割位点，实现对基因组的编辑。 二、实验步骤 设计sgRNA：根据实验需求设计合适的sgRNA序列。 合成sgRNA：将设计好的sgRNA序列进行合成。 表达Cas9和sgRNA：将Cas9和sgRNA进行表达，通常通过载体进行。 切割目标基因：利用Cas9酶切割目标基因序列。 筛选单克隆：通过筛选获得含有编辑基因的单克隆细胞。 基因编辑结果验证：对基因编辑结果进行验证，确认编辑成功。 通过以上步骤，你可以实现对基因组的精准编辑，为科研实验提供有力支持。𐟔찟’က

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CRISPR/Cas9攻略，科研必备！ 听说大年三十还在刷科研帖的朋友，来年实验都会顺利哦！ 一、实验步骤 设计sgRNA 𐟓 首先，你需要设计出能够精准识别目标基因的sgRNA。这个过程需要一定的生物信息学知识，确保你的sgRNA能够有效地与目标序列结合。 合成sgRNA 𐟧슨彤𙋥Ž，接下来就是合成sgRNA。这一步通常需要专业的生物技术公司来完成，确保合成的准确性。 表达Cas9和sgRNA 𐟒‰ 将设计好的sgRNA与Cas9蛋白一起表达，这是基因编辑的关键步骤。你需要构建一个能够同时表达Cas9和sgRNA的载体，并将其导入到细胞中。 切割目标基因 ✂️ 一旦Cas9和sgRNA进入细胞，它们就会识别并切割目标基因。这个过程是基因编辑的核心，切割的准确性直接影响到后续的实验结果。 筛选单克隆 𐟔 切割完成后，你需要筛选出那些被成功编辑的细胞。这一步通常通过PCR或其他分子生物学技术来完成，确保你得到的是编辑成功的单克隆。 基因编辑结果验证 ✅ 最后，你需要验证基因编辑的结果。这可以通过测序或其他分子生物学方法来完成，确保你的基因编辑是准确无误的。 二、实验原理 基因敲入 𐟔犥œ胒ISPR/Cas9系统中，sgRNA识别并结合目标基因的靶向序列，形成RNA-DNA杂交。Cas9酶作为一种DNA剪切酶，可以相对准确地切割目标DNA序列。随后，donor DNA通过同源重组（HDR）的方式将外源基因整合到这个切割位点上，实现对基因组的编辑。 基因敲除 ✖️ Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。通常情况下，细胞会采用高效的非同源末端连接方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象，造成移码突变，使靶标基因失去功能，从而实现基因敲除。 希望这篇指南能帮助你更好地理解CRISPR/Cas9基因编辑技术，祝你实验顺利！

CRISPR-Cas9基因编辑全解析 今天，我想和大家聊聊一个超级酷的技术——CRISPR-Cas9基因编辑系统。准备好了吗？Let's go！ 𐟌Ÿ CRISPR-Cas9系统的核心组件 首先，让我们来了解一下CRISPR-Cas9系统的核心组成部分。最常用的Cas9蛋白来自一种叫sp的细菌。这个蛋白就像一把分子剪刀，可以在基因组的特定位置切断DNA双链。 接下来是sgRNA，也就是引导RNA。它是由两部分组成的： 𐟓 crRNA：大约20个碱基长，与目标DNA序列精确互补，决定了Cas9的切割位置。 𐟓 tracrRNA：与Cas9蛋白结合，确保sgRNA与Cas9形成稳定复合物。 最后，还有一个PAM序列，这是Cas9切割的必要条件。Sp的Cas9识别的PAM是5'-NGG-3'（N表示任意碱基）。目标DNA中必须在靶序列下游存在PAM序列，否则Cas9无法切割。 𐟌Ÿ CRISPR-Cas9基因编辑的步骤 选择编辑位点 𐟎斥…ˆ，你需要选择一个基因组中需要修改的区域，并设计与该区域互补的sgRNA靶序列。然后确定PAM序列的位置，选择的靶序列必须靠近PAM序列，以确保Cas9能在正确位置切割。 形成sgRNA与Cas9复合物 𐟧슳gRNA可以在体外合成或在细胞内表达。sgRNA和Cas9蛋白结合形成复合物，并准备寻找靶标DNA。 识别与结合DNA 𐟔 sgRNA与基因组中的目标序列互补配对（通常是20个碱基的长度）。Cas9蛋白会扫描DNA，寻找与sgRNA互补的序列。当找到靶序列并确认其附近有PAM时，Cas9会与该区域结合。 切割DNA双链 ✂️ 当Cas9与靶DNA结合后，Cas9的两个切割活性位点（HNH和RuvC结构域）会分别切断DNA双链。HNH结构域切割与sgRNA互补的DNA链，而RuvC结构域则切割另一条非互补链。结果是DNA双链被切断，产生一个双链断裂（DSB）。 修复DNA断裂 𐟛 ️ 细胞有两种方式来修复DNA断裂： 非同源末端连接（NHEJ）：这是细胞对DNA断裂的快速修复途径，直接将断裂的DNA片段连接在一起。修复过程中常会引入小的插入或缺失，导致基因突变或失活（即敲除基因）。 同源重组（HDR）：如果科学家在细胞中加入一个供体DNA模板，细胞可以利用模板进行精确修复。这使特定的碱基可以被替换或插入，达到精确编辑的目的（即敲入基因）。 希望这篇文章能让你对CRISPR-Cas9基因编辑技术有一个清晰的认识！如果你有任何问题或想了解更多，欢迎在评论区留言哦！

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