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免疫沉淀实验常见问题及解决方案ꊥ 疫沉淀(IP)是一种用于纯化和富集目标蛋白的技术,在蛋白质组学研究中常用于识别蛋白质与蛋白质之间的相互作用。以下是免疫沉淀实验中常见的一些问题及其解决方案,希望对大家的实验有所帮助。 背景高 样本中有不溶蛋白残留:离心后应立即取出上清。 洗涤不充分:优化洗涤缓冲液,通过加入去垢剂(如0.5-1% NP-40/Triton X-100/Tween-20)或增加盐离子浓度(如250mM NaCl/1-2mM DTT/ME),增加洗涤时间和次数来提高洗杂效率。 非特异蛋白与磁珠结合:磁珠用BSA预封闭不充分,确保BSA新鲜,将磁珠和1% BSA孵育1小时,使用前PBS洗涤3-4次。 抗体特异性不好:使用亲和纯化的抗体。 抗体用量太多:尝试使用更少的抗体。 裂解液中蛋白含量太高:减少样本用量。 蛋白和抗体非特异结合:在免疫沉淀之前预先将磁珠和样本孵育,清理样本中可以和磁珠结合的成分,一些研究人员也使用同型对照来预清理裂解液。 没有检测到目的蛋白洗脱 样本中目的蛋白不表达或低水平表达:如果表达水平低,需要增加裂解液用量,但也可能导致非特异结合的增加,所以在免疫沉淀之前需要预先清除裂解液。 抗体用量不够:检查抗体用量,提高使用量。 目标蛋白没有从磁珠上洗脱:需要确保使用的洗脱缓冲液正确。 抗体没有结合磁珠:确保使用的磁珠和抗体亚型匹配,磁珠正确保存,防止变质或干燥。 裂解液中盐碱度太高:改用低盐碱度裂解液,一般可选NP-40, RIPA, western及IP细胞裂解液。 加样顺序对靶蛋白得率的影响 磁珠、抗体、抗原样本混合一起孵育:速度最快,但靶蛋白纯度和得率会很低。 间接法:抗体和抗原样本先结合,再加入磁珠孵育,靶蛋白得率最高。 直接法:磁珠先和抗体结合,再加入抗原孵育,对于表达丰度高的蛋白,两种方法差别不大,如果表达丰度低,要选择间接法获得更高的靶蛋白得率。 希望这些小知识能帮助你更好地进行免疫沉淀实验!ꀀ
细胞衰老的九大标志性变化 1. 细胞周期停滞(Cell cycle arrest) 细胞衰老时,细胞周期会停止,主要通过p53、RB、p16和p21等通路实现。这些基因和蛋白质的作用是阻止细胞继续分裂,从而避免损伤DNA的细胞进入分裂期。 DNA损伤反应(The DDR) DNA损伤反应(DDR)是细胞识别和修复DNA损伤的机制。在衰老细胞中,DDR持续激活,导致2AX和T53BP1等标记的增加,此外,还会出现核层蛋白Lamin B1的丢失。 核变化(Nuclear changes) 衰老细胞的核内发生显著变化,包括异染色质的增加,如H3K9me3和H3K27me3标记。这些变化会影响基因的表达,通常与基因沉默有关。 抗凋亡通路的上调(Upregulation of anti-apoptotic pathways) 衰老细胞通过上调抗凋亡通路,避免自我凋亡。这些通路包括ABL1、EFNB1、EFNB3、BCL2L1、SERPINB2和PI3K等分子,这些分子能够增强细胞的生存能力。 SASP和炎症(SASP, inflammation) 动ᰨ细胞会分泌一系列促炎性因子,形成所谓的衰老相关分泌表型(SASP),这些因子包括IL-6、IL-1IL-1GDF15、TGF和IFN퉣这些分子会诱发局部和全身性的炎症反应,影响周围组织。 溶酶体含量增加(Increased lysosomal content) ꊨᰨ细胞中的溶酶体数量增加,这与细胞内清除受损成分的需求增加有关。溶酶体中半乳糖苷酶(gal)活性的增加常被用作衰老标志。 代谢适应(Metabolic adaptations) ᰨ细胞的代谢发生变化,线粒体功能受损,导致活性氧(ROS)水平升高。这些变化会进一步加剧细胞损伤和衰老。 细胞表面标志物(Cell surface markers) 𗯸 衰老细胞在表面表达一组特定的标志物,如uPAR、DDP4、NOTCH1、TNFRSF10D、NOTCH3、CD36、氧化波形蛋白(oxidized vimentin)和ICAM1。这些标志物有助于识别和清除衰老细胞。 形态变化(Changes in morphology) 𑊨ᰨ细胞在形态上发生显著变化,如变大、变扁,细胞核形态异常等,这些变化是衰老过程中累积损伤的结果。
猫咪宠物奶推荐:6款热门选择 𑧌륒ꥈ家乐可是个爱喝奶的小家伙,从小到大每天早上都会给他30-50ml的奶,既补钙又能强壮骨骼和关节,还能护眼和保护肠胃。今天就来分享几款他最爱的宠物奶吧! 澳洲A2駉奶 这款宠物奶是猫狗通用的,0乳糖,全球只有30%的A2 ꨛ白奶源,其他大多是A1 ꨛ白或者A1A2混合型。A2 ꨛ白对肠胃更友好,适合敏感的猫咪。 韩国TAMSAA宠物奶(蓝色款) 这款也是猫狗通用,主要成分是100%韩国1A级原油,无添加人工稳定剂,含有维生素和矿物质,乳糖完全分解,促进消化吸收,还能改善便便气味。特别添加了油卡提取物,帮助补钙和骨骼健康,眼睛也更健康。 韩国TAMSAA宠物奶(黄色款) 这款同样是猫狗通用,和蓝色款差不多,但添加了构成软骨的必需成分“葡糖胺”,有助于关节健康。 日本每日特远宠物牛奶 这款宠物奶采用全球知名酶制剂公司诺维信的恒温酶解工艺,将牛奶中的二糖、乳糖直接分解为单糖,零乳糖,解决宠物乳糖不耐受的问题,减少肠胃负担,营养更易吸收。除了丰富的钙,还添加了低聚果糖、卵磷脂、维生素A、B1、B2、C、D、E、牛磺酸等,还能补充水分,解决宠物不爱饮水的问题。 韩国BITE ME宠物牛奶 这款也是猫狗通用,采用1A级100%无抗生素原油,含有维生素A、D3、E、磷酸钙、血磷酸亚铁、葡萄籽提取物、蛋氨酸、胡萝卜素等。通过热处理技术将高浓度培养的乳酸菌制成乳酸菌丝菌热处理,不会破坏肠道,帮助有益菌增殖,还有强大的抗炎作用和增强免疫力的效果。 韩国NUTRI PLAN宠物金枪鱼营养奶 这款是专门为猫咪设计的,采用乳糖分解的A1级生鲜奶,含有金枪鱼omega-3脂肪酸,有助于毛皮健康,还含有必须的氨基酸和牛磺酸,有助于心脏和眼睛健康。姜黄可以保护肠道健康。 望这些推荐能帮到你,让你的猫咪健康成长!
抖音你好,除了龚俊和沙雕外其他视频都不用推给我了,谢谢! 抖音亇ぜ孑 除了ᘜᏅᑨᘜ峻禾ロ莎ᗠᓰᕣᏅᣭᕣᓰ萁他眡頻者苚推給卧了謝謝 Hello, TikTok. Except for Gong Jun and Sha Diao, you don't need to push any other videos to me. Thank you. 틱톡 안녕하세요 공준과 사조를 제외한 다른 동영상은 저에게 밀지 않아도 됩니다 감사합니다 ティックトックさん、こんにちは。龔俊と沙雕以外の動画は、私にプッシュする必要はありません。ありがとうございます。
IP-MS分析,EZH2是多梳抑制复合体2 (PRC2)的功能性酶成分,与长期转录抑制相关。因此,确定EZH2为与Mi-2白复合物相关的染色质调节蛋白 (图2a)。内、外源性Co-IP表明EZH2和Mi-2혥觛𘤺作用(图2b-c),而EZH2敲减也显著上调Cxcl9和Cxcl10的水平(图2d)。 之前的研究表明, H3K27me3介导EZH2抑制ISGs的表达。体外证实EZH2沉默后,H3K27me3激活被显著抑制,且H3K27me3激活介导了由Mi-2EZH2复合物调控的ISG表达(图2e-g)。进一步ChIP分析证实,Mi-2𒉩,Cxcl9和Cxcl10启动子区域的H3K27me3水平被抑制(图2h)。表明,Mi-2EZH2互作激活ISG转录,是由H3K27me3介导的。 全文分享可查阅:【《Nat Commun》解读:从药靶发现到药物研究看这一篇就够了!Mi-2过激活EZH2甲基化促进黑色素瘤免疫逃逸】。 #科研#⠂ #coip实验#⠂ #研究生#
羟醛缩合反应机理与实例详解 羟醛缩合反应(aldol condensation)是有𐢧醛或酮在酸或碱的催化作用下,缩合形成羟基醛或羟基酮的反应。 젥应机理 酸催化: 酸催化下,酮式结构转为烯醇式; 烯醇对质子化的酮进行亲核加成,得到质子化的-羟基酮; 经过质子转移和消除水,生成不饱和醛酮。 碱催化: 碱催化下,生成烯醇负离子; 烯醇负离子对醛(或酮)发生亲核加成; 加成产物从溶剂中夺取一个质子,生成羟基醛(或羟基酮),进而生成不饱和醛酮。 反应特点 混合物生成:两个不同的醛和酮进行羟醛缩合时,常常得到混合物。实际应用时,常用一个无𐢧芳香醛(提供羰基)和一个有𐢧脂肪族醛、酮(提供烯醇负离子)进行缩合反应。 亚甲基提供碳负离子的选择: 碱性条件下,主要受动力学控制,碱性试剂倾向于拔去酸性强、位阻小、易于碱结合的氢。 酸性条件下,主要受热力学控制,倾向于形成较稳定的烯醇(取代基多)。 反应实例 将两原料溶于乙醇中,然后滴加5滴piparifina,升温至70℃反应。 在MeOH中加入HCI,升温至70℃反应。 在MeOH中加入NaOH,升温至70℃反应。 在EtOH中加入NaOH,升温至70℃反应。 在MeOH中加入Mesicl和HCL,升温至70℃反应。 羟醛缩合反应在有机化学中具有重要意义,了解其机理和特点有助于更好地理解和应用这一反应。
SDS-PAGE缓冲液,简单配方! 在进行SDS-PAGE电泳时,使用合适的上样缓冲液至关重要。以下是一个简单而有效的5xSDS-PAGE Loading Buffer的配方,帮助你更好地分离和可视化蛋白质。 配方组分: 250mM Tris-HCl(pH 6.8) 10%(W/V) SDS 0.5%(W/V) BPB 50%(V/V) 甘油 5%(W/V) 巯基乙醇 젩 制步骤: 将1.25mL 1M Tris-HCl、0.5g SDS、25mg BPB和2.5mL甘油混合在10mL塑料离心管中。 加入去离子水,搅拌至完全溶解,然后定容至5mL。 将混合物分装成500的小份,室温保存。 使用前,向每小份中加入25的2-ME,并搅拌均匀。 加入2-ME的Loading Buffer可以在室温下保存一个月左右。 注意事项: 确保所有试剂都是新鲜的,并且没有受到污染。 在使用前,检查所有试剂的浓度和纯度。 通过以上步骤,你可以轻松制备出高质量的SDS-PAGE上样缓冲液,为你的蛋白质研究提供有力的支持。
比熊犬的精致餐单:鸡肉与鹿肉的美味搭配 这周,我为我家的小比熊准备了一系列的鸡肉类餐包,真是让人垂涎欲滴! 鸡肉美味餐包 我给它尝试了“它力量”的鹅肉小圆饼,复水速度超快,几乎是一眨眼就吸干了。我还加了几次牛奶,结果很快就被它吸光了。 鸡胸肉餐包 “for pet”的鸡胸肉餐包虽然只有40g,质地比较结实,但带点汤汁,整块给肉圆吃也毫无压力。不过,这个餐包似乎没有太多特色,所以不会回购。 鸡胸肉美味 “但马高原”的鸡胸肉餐包简直是yyds!无论是质地还是口感都让人满意,强烈推荐! 其他美味 “bite me玄米脆”和“pets plate 蛋黄粉”都是不错的选择,特别是“淳感A2嶢,好喝到停不下来! 营养均衡粉 “D&W均衡营养粉”是百搭款,不知道加点什么的时候就可以撒上一些,简单又方便。 P3:鲜嫩的RAWZ狗粮、牛肝、鸡胗餐包、bigwood烤鸡柳餐包、the dog烤鱼片,还有新鲜水果和蔬菜。每一口都是满满的营养和美味! P4:FDA青口贝、woof鹿肉冻干、funfun鸡软骨餐包、biteme蓝莓味奶、loasis奶酪丝、petsgreen鸡肉马卡龙、iliosmile十胜野菜。每一款都是精心挑选,让肉圆吃得开心又健康。 P5:北之极鹿肉肠、dr.mamma鸡肉青口贝小餐包、Yes孢子甘蓝、牧场来信鸭鹅冻干、pristine牛肉汤、susu果蔬干。每一款都是精心挑选,让肉圆吃得开心又健康。 每一餐都充满了爱和关怀,希望这些美食能让我的小比熊健康快乐地成长!𞀀
菲欧德蔓理疗霜:8款精选产品推荐 菲欧德蔓的理疗霜产品种类繁多,每一款都是针对特定肌肤需求的精心设计。无论是面霜还是眼霜,都能满足不同肌肤的需求,且不含矿物油,确保肌肤的吸收和舒适度。以下是八款精选理疗霜的详细介绍: 1️⃣ 水润保湿乳霜 - 适合抗初老肌肤,深层补水,保持肌肤水润。 2️⃣ 平衡润泽面霜 - 专为干燥肌肤设计,兼具补水和补油功能。 3️⃣ 控油平衡乳霜 - 调节皮脂腺大小,有效控制油脂分泌,保持肌肤清爽。 4️⃣ 净颜平衡乳霜 - 调节皮脂腺活性,减少黑头和粉刺的形成。 5️⃣ 焕活修复乳霜 - 为肌肤充电注氧,抵御氧化,缓解肌肤疲劳。 6️⃣ 亮彩紧肤乳霜 - 与美丽项目搭配使用,效果更佳。 7️⃣ 紧致抗皱乳霜 - 立即提升肌肤紧致度,淡化颈纹、眼纹和表情纹。 8️⃣ 敏感肌盈润乳霜 - 强化肌肤屏障,改善肌肤不耐受现象。 品牌独家MEIMA技术 - 三重载体工法,确保高活性成分靶向释放、缓释作用,降低刺激性,提高成分稳定性。 最外层:磷脂(与人体细胞膜结构相同) 第一层:植物萃取提取物 第二层:抗氧化成分、海草成分、寡肽类 最里层:精华成分或高活成分 𑠅3C三向平衡法则 - 模仿皮肤细胞膜的磷脂结构,保护肌肤免受污染。 AG复合物 - a葡聚糖复合物,有助于控制表皮菌群稳定性 BG复合物 - ᨁ糖复合物,加强肌肤深层防御系统 MG6P复合物 - 一种预先唤醒的葡萄糖,供给肌肤高能综合能量 照瑞士GMP标准进行研发生产 - GMP认证是瑞士本土药品动态生产管理认证,确保产品的安全性和有效性。
一、试剂信息 英文名称:Hyaluronate Methacrylate,HA-MAc,HA-MA 中文名称:透明质酸甲基丙烯酸酯 二、试剂描述 透明质酸(HA, 也称为透明质酸)是一种线性多糖,由N-乙酰基葡糖胺和D-葡糖醛酸组成的重复二糖单元组成。 透明质酸甲基丙烯酸酯是一种经过化学修饰的透明质酸衍生物。HA-MA能够与其他生物分子如抗体、蛋白质等结合,形成具有特定功能的生物分子复合物。由于其分子中的甲基丙烯酸酯基团具有较好的交联反应性,HA-MA可以与其他含有活性基团的化合物(如交联剂)进行交联反应,形成交联网络结构,从而增强透明质酸的机械性能和稳定性。 HA-MA可以作为细胞培养基质,支持细胞的生长和分化,并调节细胞的功能和表型。HA-MA还可用于制备具有交联能力的透明质酸基材料,如组织工程支架、分子输送载体等。 三、试剂性质 分子量:10K、20K、50K、250K、340K、500K、800K、1000K、1500K、2200K 规格:5mg,10mg,25mg 纯度:≥95% 供应商:陕西新研博美生物科技 稳定性:-20℃以下冰冻、干燥、避光。 溶解条性:溶于部分有机溶液。 注意事项:避免频繁解冻,现配现用,保持干燥,避光。 三、相关试剂 Neu5Ac Methyl Ester 145240-80-8 Fmoc-Thr(Ac4Man-2Ac3Man-2Ac3Man-OH 482576-74-9 Fmoc-Thr(Ac4Man-OH 169219-08-3 Fmoc-Thr(Me,Ac4Neu5Ac-6Ac2GalNAc-OH 189561-77-1 Fmoc-Ser(Ac4Man-2Ac3Man-2Ac3Man-OH 1427205-93-3 Fmoc-Ser((Ac4Gal-3)Me,Ac4Neu5Ac-6AcGalNAc-OH 174783-91-6 Fmoc-Ser(Ac4Gal-3Ac2GalNAc-OH 125760-30-7 Fmoc-Ser-OtBu 110797-35-8 以上由陕西新研博美生物科技WWH编辑提供的试剂信息仅用于科学研究等。
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